网上有关“从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办”话题很是火热 ，小编也是针对从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办寻找了一些与之相关的一些信息进行分析 ，如果能碰巧解决你现在面临的问题，希望能够帮助到您 。
分别采用辛酸硫酸铵法(CAAS)、硫酸铵沉淀法(AS)和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较.结果表明: CAAS法提取IgG的纯度为67-5﹪,高于AS法(43-2﹪),低于DEAE法(100﹪);CAAS法提取IgG的回收率为51-2﹪,远高于DEAE(8-9﹪),略低于AS法(63-8﹪).将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度.ELISA试验结果表明EAE法的OD值明显降低,表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性.说明CAAS法是一种操作简单 、成本低 、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法.
阴离子交换层析法纯化gp130单克隆抗体B-S12
Purification of monoclonal antibody B-S12 from mouse ascites by strong anion exchange liquid chromatography
<<中国免疫学杂志 >>2006年08期
马泓冰 , 徐颖 , 夏瑜 , 朱一蓓 , 庄羽美 , 郁健峰 , 张学光
目的:建立一种从小鼠腹水中获得高纯度、活性好、纯化过程易于放大的抗gp130单克隆抗体B-S12的纯化方法.方法:经硫酸铵沉淀等预处理后的腹水样品,在阴离子交换层析柱上进行分离纯化,用MTT法检测纯化后抗体的生物学活性.结果:腹水样品经硫酸铵沉淀 、PBS复溶,用pH 7.0 、20 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液稀释10倍后上强阴离子交换层析柱,NaCl梯度洗脱,可获得纯度大于95﹪的B-S12抗体,回收率达73﹪,在体外对XG-2细胞有明显的促增殖作用.结论:建立了快速高效从小鼠腹水中纯化B-S12的方法,为该抗体的进一步应用提供了必要的实验基础.
2006年 10期《黑龙江畜牧兽医》
Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine
起止页码：14-16
国际标准刊号：ISSN 1004-7034
国内统一刊号：CN 23-1205
小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究
周玉[1] 李岩松[2] 潘风光[2] 谭建华[3] 柳增善[1] 王哲[4]
摘 要:分别采用辛酸-硫酸铵法（CA—AS）、硫酸铵沉淀法（AS）和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较 。结果表明：CA—AS法提取IgG的纯度为67．5％，高于AS法（43．2％） ，低于DEAE法（100％）；CA—AS法提取IgG的回收率为51．2％ ，远高于DEAE（8．9％），略低于As法（63．8％）。将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度。ELISA试验结果表明：DEAE法的OD值明显降低 ，表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性 。说明CA—AS法是一种操作简单 、成本低 、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法 。[著者文摘]
关键词:小鼠腹水IgG 辛酸 硫酸铵 离子交换层析
小鼠腹水抗体的制备
1．抗原的处理与小鼠腹水粗抗体的收集
现在以B亚基的抗体制备为例说明：
取2mg的蛋白 ，溶于100?l的10％SDS中，加入等体积的上样缓冲液 ，沸水浴3min ，进行SDS－PAGE。
将胶的两边缘切带染色，脱色后在相应的位置从分离胶上切下未染色目的蛋白带 ，无菌水洗涤 ，用匀浆器匀浆后，再在2～5mM的PBS中透析5h以上 ，冷干 。
将冷干的样品用500～800?l 的2mM～5mM的PBS溶解（得到体积约600～1000?l）,加入等体积的弗氏完全佐剂 ，大约乳化2h～3h 。确保乳化完的蛋白浓度为0.5~1.0mg/ml。将乳化好的混合液用1ml的一次性注射器注射小鼠，每只50～100?l，即50～100?g的抗原蛋白 。
第一次加强注射：10～14天后将制备的样品用弗氏不完全佐剂乳化 ，同样注射小鼠 。
第一次加强注射后10天左右 ，用小鼠的血清，通过酶联免疫的方法（ELISA）测定腹水抗体效价来检测抗体的存在。
第二次加强注射：如果ELISA得到阳性的结果 ，用弗氏不完全佐剂乳化抗原 ，再次注射小鼠，并在注射后的2～3天后注射H22腹水瘤细胞 ，每次注射量再1.5×106~2.0×106个细胞 ，7天后产生腹水 。如果两周后小鼠仍无腹水，再次注射抗原以及瘤细胞 。
收集腹水 ，每只小鼠可以收集几次 ，每次3～10ml不等，收集腹水至小鼠死亡。腹水中加入0.01%的叠氮化钠以防止长菌 ，再在12000rpm离心2次 ，保留上清 。测定效价后，进行抗体的纯化，分装 ，－70°C保存 。
[注]：（1）在SDS-PAGE时 ，分离胶中加入300?l SDS，浓缩胶中加入200?l SDS ，以确保SDS足量。
（2）在制备蛋白样品过程中会损失一部分抗原大约25％～50％
（3）收集的小鼠腹水要分装到小指管中 ，不同的小鼠产生的腹水效价不同，做好标记。
2．抗体纯化
用1/10体积的1.0mol/L Tris(pH8.0)调节粗制抗体的pH值 。
用0.1mol/L Tris(pH8.0)平衡柱子 。
将抗体溶液用蛋白G微珠层析柱过滤 ，每次上2ml的样品。
用10倍体积的0.1mol/L Tris(pH8.0)洗涤微珠 。
用10倍体积的0.01mol/L Tris(pH8.0)洗涤微珠 。
用2ml的50mmol/L 甘氨酸(pH3.0)洗脱滤柱。收集洗脱峰于装有1/10体积的1.0mol/L Tris(pH8.0)的试管内 ，轻轻摇匀 。
用10倍体积的0.1mol/L Tris(pH8.0)洗涤微珠 。重复以上过程。
测定蛋白浓度，并进行SDS-PAGE检测抗体的纯度 。
[注]：配Tris与甘氨酸溶液用盐酸来调pH值
3．酶联免疫检测抗体的效价（ELISA）
用包被液稀释抗原至50～100?g/ml ，加入酶标板中 ，每孔100?l ，4°C过夜
用洗涤液清洗酶标板3次 ，每次在摇床上摇5min～8min ，37°C下用封闭液封闭酶标板4h以上 。
待测的腹水抗体按1：1000～1：128000稀释，分别加入孔中，每孔100?l ，37°C孵育2h ，再用洗涤液清洗3次。
将辣根过氧化物酶标记的二抗按照1：1000稀释，每孔加入每孔100?l ，37°C孵育1h ，再洗涤3次 。
加入辣根过氧化物酶显色液100?l，显色5min后 ，加入终止液100?l ，终止显色 。
以不注射抗原的小鼠腹水为阴性对照（也要相应于含抗体的腹水稀释），以只加显色液与终止液的孔为空白对照 ，用酶标仪测定492nm波长下的吸收值 ，确定抗体的效价。
所用试剂：
包被液：0 .50g Na2CO3，0.4g NaHCO3 ，200ml ，pH9.6
PBS ：10mmol/LNaH2PO4, 10mmol/LNa2HPO4,150mmol/LNaCl，pH7.4
封闭液：3％BSA溶于PBS中
洗涤液：0.05~0.1％Tween-20溶于PBS中
底物缓冲液：0.1mol/L柠檬酸，0.2mol/LNa2HPO4 ，pH5.0 ，用时每10ml的缓冲液加入4mgOPD(邻苯二胺)以及20?l 30％H2O2
终止液：2mol/L H2SO4
[注]：（1）在洗涤时应当确保充分，否则会出现阴性对照的值偏大。
（2）空白对照最好做一排孔（8个或12个） 。
（3）底物缓冲液要现用现配 。
关于“从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办 ”这个话题的介绍 ，今天小编就给大家分享完了 ，如果对你有所帮助请保持对本站的关注！
本文来自作者[sqyy]投稿，不代表瑞骐号立场，如若转载，请注明出处：https://www.sz-rich.com.cn/zlan/202507-9199.html
评论列表（4条）
我是瑞骐号的签约作者“sqyy”！
希望本篇文章《从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办》能对你有所帮助！
本站[瑞骐号]内容主要涵盖：国足,欧洲杯,世界杯,篮球,欧冠,亚冠,英超,足球,综合体育
本文概览：网上有关“从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办”话题很是火热，小编也是针对从腹水中纯化的抗体不溶解怎么办寻找了一些与之相关的一些信息进行分析，如果能碰巧解决你现在面临的问题，希望能够...